酶底物法检测水中大肠菌群实验操作步骤详解

　　水中大肠菌群的检测是人类生活饮用水安全的保障，能有效预防人体被大肠菌群感染。我国早前检测水质大肠菌群采用的方法是平皿计数法，此方法操作较为复杂，实验人员也需要有较高的技术素养，普及实施较难。

　　酶底物法(Defined Substrate Technology,DST)是目前全球都在广泛使用的大肠菌群检测方法，近些年来我国也开始尝试引进使用，并于2018年将此方法纳入国标，该方法操作简便快捷，时间周期短，数据准确，不需要有严格的实验条件即可进行，对操作人员要求也不高，下面优尔普就来介绍一下酶底物法检测大肠菌群的具体步骤。

酶底物法检测大肠菌群仪器

酶底物法检测大肠菌群操作方法

1、工作原理

　　酶底物法是在选择性培养基上产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)的细菌群组，其能分解色原底物释放出色原体，使培养基呈颜色变化，以此来检测水中的大肠菌群。

2、立科酶底物法简介

　　立科酶底物法使用Colitech试剂进行检测，这种试剂符合《生活饮用水标准检测方法》，其采用GB/T5750.12-2006中固定底物技术的MMO-MUG培养基，当试剂加入含有总大肠菌群细菌组的水样，目标细菌在含有固定底物ONPG-MUG的培养基中繁殖，大肠菌群细菌组产生的特异性生物酶β-半乳糖苷酶能分解MMO-MUG培养基中的固定色原底物ONPG，产生特征性黄色荧光，同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性B-葡萄糖苷酸酶能分解MMO-MUG培养基中的固定荧光底物MUG，产生特征性蓝色荧光，以此定性检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌。

　　当水样中少数非目标细菌的生物酶试图和ONPG、MUG反应并干扰检测结果时，Colitech培养基中特殊配方的基质会抑制其反应过程，控制假阳性的产生。同时，这些特殊培养基质可以有效促使目标细菌的生物酶和固定底物反应，所以假阴性发生率比传统方法更低。

3、仪器与试剂

仪器：培养箱(36±1℃)、高压蒸汽灭菌器、定量盘(51孔和97孔)、立科程控定量封口机、试管、稀释瓶、移液管、量筒.

酶底物法检测仪器及其配置

试剂：立科Colitech酶底物法检测试剂，灭菌稀释水.

4、酶底物法检测操作步骤

1)水样稀释

　　检测实验所需水样为100ml，若水样污染严重可进行稀释(取10ml水样加入到90ml的灭菌稀释水中，必要时可加大稀释度)。本实验取20个水样分别进行总大肠菌群(1-10号)和粪大肠菌群(11-20号)的检测。

大肠菌群水样取样瓶

2)定性试验

　　用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样，加入专用培养基，摇晃至溶解，以36±1℃的温度在培养箱培养24小时。

3)定量试验

　　用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样，加入专用培养基，摇晃至溶解，将该溶液导入51孔(总大肠菌群)和97孔(粪大肠菌群)的定量盘内，然后将定量盘放入立科程控定量封口机封口，以36±1℃的温度在培养箱培养24小时。

酶底物法检测水质大肠菌群操作具体流程：http://www.ulp17.com/news/175.html

5、结果判定

酶底物法检测大肠菌群对比

1)定性反应

　　对水样培养24小时后进行结果判定，如颜色变成黄色，则判定为阳性，表示水中含有大肠菌群，若水样未发生颜色变化，则判定为阴性，表示水样中不含大肠菌群。定性结果以大肠菌群检出或未检出作报告。

2)定量反应

　　对培养24小时后定量盘内的水样进行结果判定，若孔穴内的水样有黄色反应则表示该孔穴中含有大肠菌群，总大肠菌群对照51孔定量盘MPN表，粪大肠菌群对照97孔定量盘MPN表，结果以MPN/L报告。若所有孔穴均未产生黄色反应，以未检出作报告。

　　有关实验室使用酶底物法检测水中大肠菌群的方法步骤就和大家分享到这里了，酶底物法操作简便，数据准确，二次污染小，无需再无菌室内操作，满足GB5749-2006生活饮用水标准和GB8978-1996污水综合排放标准，适用于源水、瓶装水、饮用水、畜牧用水、废水、再生水、食品水、医疗用水等各类水样，目前已在国内广泛应用。